洗脱产物杂带多，是什么原因？

（1）杂蛋白吸附。由于组氨酸，色氨酸，半胱氨酸等是蛋白质中很常见基团，而蛋白折叠可能导致几个这样的氨基酸残基临近，这样也会使它们和磁珠的作用力增加。可以用不同浓度的咪唑进行梯度洗脱，在样品及平衡缓冲液中添加0.5%吐温或Triton X-100，或5~50%的甘油，可以避免因为疏水相互作用导致非特异吸附，或使用钴离子螯合磁珠（AnnbeadsTM IDA-Cobalt）。此外，要获得纯度较高的蛋白，需要对裂解、结合缓冲液、洗涤缓冲液、洗脱缓冲液的组分、pH、咪唑浓度等进行优化。若还是不能获得高纯度的蛋白，则需要考虑使用多步纯化，结合使用离子交换、凝聚过滤等纯化方法； （2）菌体破碎条件太剧烈导致蛋白断裂。确保在冰浴条件下破碎；降低超声破碎的强度，缩短时间；适当稀释样品，添加核酸酶，降低样品粘稠度； （3）蛋白被部分水解：添加合适的蛋白酶抑制剂，并尽可能在低温下操作。